佐 剂

一、佐剂的定义

免疫佐剂(immunoadjuvant)：是一类非特异性免疫增强剂，先于抗原或与抗原混合同时注入动物体内，能非特异性地增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质，简称佐剂(adjuvant)。佐剂广泛应用于人工主动免疫和疫苗研制中，通过加入佐剂可以减少抗原用量和接种次数。

二、佐剂的作用

免疫佐剂能使非特异性加强或修饰与其共同注入体内的抗原的免疫应答，与仅用抗原免疫相比，使用佐剂能增大抗体产量，许多机制能够参与到佐剂介导的放大效应中，佐剂的作用机制有：① 刺激先天性免疫应答，有助于抗原特异性B细胞和T细胞的活化；② 在接种部位形成抗原储存库，使抗原缓慢释放，延长抗原在局部组织内的滞留时间，使抗原与免疫细胞较长时间接触并激发对抗原的应答；③ 增加抗原表面积，提高抗原的免疫原性，辅助抗原暴露并将能刺激特异性免疫应答的抗原表位提呈给免疫细胞；④ 促进局部的炎症反应，增强吞噬细胞的活性，促进免疫细胞的增值和分化，诱导和促进细胞因子的分泌。⑤增强抗原的免疫原性，使无免疫原性或仅有微弱免疫原性的物质变成有效的免疫原；⑥增强机体对抗原刺激的反应性，提高初次免疫应答和再次免疫应答所产生的的抗体水平；⑦改变抗体的产生类型，使由产生IgM转变为产生IgG；⑧诱导迟发型反应，增强机体的细胞免疫应答。

三、佐剂的选择

(1)与单独使用抗原相比，佐剂与抗原联用能刺激机体产生较强的免疫反应。

(2)能够激活强的体液和T细胞免疫应答。

(3)能够递送更好的免疫记忆或长期免疫。

(4)在宽范围的时间、储存、温度和pH下质量保持稳定。并且易于处理和储存。

(5)安全无毒性：不含杂质或有害物质，通过肌肉、皮下、静脉、腹腔等各种途径进入动物体后无毒副作用，产品安全有效。

(6)生物相容性好：佐剂应具有良好的生物相容性，不会引起过敏或其他不良反应。

(7)价格低廉。

(8)使用方便。

(9)批间差异小。

四、佐剂的种类

佐剂的种类有很多，一般可分为以下几类：①无机佐剂：如氢氧化铝、明矾等。②有机佐剂：如分枝杆菌、短小棒状杆菌、百日咳杆菌、某些细胞因子等。③合成佐剂：包括人工合成的双链多聚核苷酸，如双链多聚肌苷酸和双链多聚腺苷酸等。④油剂：如弗氏佐剂、矿物油、植物油等。⑤药物类佐剂及一些新型佐剂。

五、佐剂产品推荐

在所有的佐剂中，油包水乳剂是认识和使用广泛的佐剂，是由Freund先研制出来的，广泛地用于与抗原联合使用以刺激高滴度抗血清的产生。弗氏佐剂(Freunds Adjuvant)是目前动物实验中常用的油包水免疫佐剂之一，常用于动物免疫制备抗体。分为不完全弗氏佐剂(IFA)和完全弗氏佐剂(CFA)，弗氏完全佐剂由矿物油、乳化剂和结核分枝杆菌组成，弗氏不完全佐剂与弗氏完全佐剂一样，只是不含有结核分枝杆菌成分。弗氏佐剂在应用过程中，可导致肉芽肿、无菌性脓肿以及溃疡的产生，弗氏完全佐剂增强免疫反应的能力相对不完全佐剂更强，所以在大多数实验方案中，只在初次免疫时使用完全弗氏佐剂(CFA)，随后的接种则使用不完全弗氏佐剂(IFA)。

洛阳佰盛生物技术有限公司自主研发的佐剂系列产品：(乳化型)快速不完全免疫佐剂、(乳化型)快速完全免疫佐剂、(乳化型)快速免疫佐剂套装、弗氏不完全免疫佐剂(加强型)、弗氏完全免疫佐剂(加强型)、小鼠单抗腹水制备专用佐剂套装、弗氏免疫佐剂套装(加强型)，这些佐剂产品具有稳定性高、无毒副作用、批间差异小、生物相容性好、使用方便、价格低廉等优势，被广大客户认可和青睐。特别适合单抗研发用小鼠的免疫以及兔子、山羊、豚鼠等多克隆抗血清的制备。

六、佐剂使用方法

在免疫动物前，先将佐剂与抗原按一定比例混合，制备成“油包水”乳状液。可溶性抗原和佐剂在乳化过程中，含有抗原的小水滴被油所捕获，在非常黏的乳剂中形成颗粒，传统的乳化方法有研磨法、注射器混合法、超声法。这些方法不仅抗原损耗大、用时长，而且乳化过程费力不易操作。为解决这些难题，洛阳佰盛生物技术有限公司研发出了一种简单高效的乳化方法，弥补了传统乳化方法的各种不足。

采用洛阳佰盛生物技术有限公司自主研发的手持移液器式佐剂乳化器进行乳化，乳化过程操作简单、方便快捷、安全性高、用时少，几分钟就可乳化完全，且抗原几乎无损耗。乳化器如下图：

乳化具体操作方法有2种：(1)将佐剂先加入乳化管，然后加少部分抗原搅拌乳化几下后再加抗原继续乳化，直到抗原加完再乳化几分钟即可。(2)抗原和佐剂加入乳化管，稍等抗原会沉入底部和佐剂分层，用搅拌器自上而下慢慢搅拌佐剂入抗原层，慢慢下移这时会发现混合液很快乳白越来越粘，几分钟就可完成。

乳化具体操作方法有2种：(1)将佐剂先加入乳化管，然后加少部分抗原搅拌乳化几下后再加抗原继续乳化，直到抗原加完再乳化几分钟即可。(2)抗原和佐剂加入乳化管，稍等抗原会沉入底部和佐剂分层，用搅拌器自上而下慢慢搅拌佐剂入抗原层，慢慢下移这时会发现混合液很快乳白越来越粘，几分钟就可完成。

乳化完成后，将一滴乳剂滴入水中，若保持完整不分散，成滴状浮于水面，则为乳化完全，为合格的油包水剂。各成分在乳化后不会分散，在运用到宿主组织后，才能发挥抗原仓库的作用。下图是我公司制备的佐剂与抗原乳化完成效果

实验表明我公司制备的佐剂较好的使用比例是30-50%。接近30%乳化粘度增加，接近50%乳化粘度减小。因此建议夏季使用低浓度冬季使用高浓度乳化；这样既能得到很好的免疫效果也能减少注射时带来的阻力困难。

七、佐剂使用注意事项

(1) 用于生产抗血清的佐剂进入机体组织后会引起非常强的炎症反应，因此在使用这些试剂时需要佩戴手套。

(2) 佐剂是以无菌形式出售的，因此操作过程尽量清洁，佐剂一旦污染，应丢弃。

(3) 过量佐剂可导致免疫抑制，从而引起抗体产出低，因此，佐剂使用量应为或

接近公司建议的剂量。

(4) 对于多肽抗原或其他免疫原性较弱的抗原，可将它们与一辅助蛋白共价偶联，比如BSA、OVA，然后再与佐剂混合。

(5) 高滴度的抗体通常经低剂量多次抗原免疫后产生，而非一次大剂量免疫。

八、公司介绍

洛阳佰盛生物技术有限公司位于十三朝古都、牡丹花城、中国历史文化名城洛阳市。主要从事生物诊断技术与材料的研发、技术服务与技术转让；相关技术与材料的应用范围涵盖食品安全检测、动物疾病诊断、人类疾病诊断、抗体制备、细胞培养、疫情防控及生命科学仪器等。客户主要包括大学(食品科学院系、生物技术院系、医学院系)、科研机构、食品安全诊断试剂公司、动物疾病诊断试剂公司、人类疾病诊断试剂公司。做好基础研发，助力祖国科研是我们的主要目标。目前公司拥有或授权使用的商标有BIOABLAB\ABLAB。